血液混匀器（血液混匀器使用说明）
摘要：
简单染色时，涂片制备是怎么固定的?为什么要固定转录组测序怎么选择材料简单染色时，涂片制备是怎么固定的?为什么要固定血涂片制备方法很多，目前临床实验室普遍采用的是手工推片法，即用楔形... 简单染色时，涂片制备是怎么固定的?为什么要固定
血涂片制备方法很多，目前临床实验室普遍***用的是手工推片法，即用楔形技术制备血涂片方法，在玻片近一端1/3处，加1滴（约0.05ml）充分混匀的血液，握住另一张边缘光滑的推片，以30°~45°角使血滴沿推片迅速散开，快速、平稳地推动推片至载玻片另一端。
血涂片应呈舌状，头、体、尾三部分清晰可分。
瑞氏染色法使细胞着色既有化学亲和作用，又有物理吸附作用。
各种细胞由于其所含化学成分不同，对染料的亲和力也不一样，因此，染色后各种细胞呈现出各自的染色特点。
以血涂片染色为例，1、***血后推制厚薄适宜的血涂片。
2、用蜡笔在血膜两头画线，然后将血涂片平放在染色架上。
3、加瑞氏染液数滴，以覆盖整个血膜为宜，染色约1分钟。
4、滴加约等量的缓冲液与染液混合，室温下染色5~10分钟。
5、用流水冲去染液，待干燥后镜检。
转录组测序怎么选择材料
1. 植物组织：植物组织一般要求重量大于 4g。首先我们要准备好液氮预冷的无酶管，并做好取样器械的消毒和去RNA酶处理，尽量选取新鲜幼嫩、生长旺盛部位的样本进行迅速***集，然后用RNase-free水对样品表面进行快速的清洗，吸干表面液体之后放入无酶管中液氮速冻（时间不要太短哦），待彻底冷冻后，转移至-80℃冰箱保存。
2. 动物组织：送样的重量一般要求在 2g以上。若在实验室中取样，做好器械的消毒和去RNA酶处理的前期工作后，迅速进行取样。取下的样品用RNase-free水迅速进行冲洗，吸干表面水分，放入预先放置在液氮中预冷的无酶管中，速冻一段时间，转入-80℃冰箱保存；对于野外***样，无法携带液氮等情况时，可以使用RNA保护剂。用RNase-free水对样品表面进行快速清洗，然后迅速切割成规定的大小（约黄豆粒），将样品完全浸没在RNA保护剂中，可以置于4℃中过夜（使保护剂渗透进组织中），转移至-80℃冰箱保存。
3.细胞样品：转录组测序中，细胞一定要达到足够的数量，以保证抽提的RNA的量。所以对于培养的细胞系，首先要确定细胞数量（建议5×10^6以上）。首先对收集好的细胞用1×PBS清洗几遍，贴壁培养的先用少量胰酶消化一下（切记不要消化过度），离心，弃PBS，加入适量的Trizol裂解液并反复吹打混匀，直至形成清亮透明的液体，转移至无酶管中，放-80℃冰箱保存。细胞量比较少的话，可以联系我们的技术同事，来针对性给出合理化建议以便RNA抽提。
4.血液样品：血液样本一般要求2ml以上。当然我们要区分全血、血浆还是血清，不同的样本因为自身特性不同需要区别对待。
全血样品记得一定要用抗凝***血管***集（不推荐肝素抗凝管，可用EDTA、柠檬酸钠抗凝剂的抗凝管），***血后轻轻倒转***血管混合4~5次，使抗凝剂与血液混匀。将***集好的全血快速转移至单独的冻存管或离心管，按照每250ul/管分装，加750ul(即三倍体积)的Trizol LS（家禽、鱼类等红细胞有核物种，按照 1:8 或 1:10 比例添加 Trizol LS/Trizol），混匀。液氮速冻后，放-80℃冰箱保存。每个环节尽可能的快速完成，避免RNA的降解。
